液相色譜儀只需要將樣品制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的影響。流動(dòng)相選擇范圍廣，固定相數(shù)量多，可以分離出熱不穩(wěn)定、不揮發(fā)、不離解、分子量范圍多樣的材料。
在LC液相色譜分析檢測(cè)樣品過(guò)程中，色譜柱會(huì)受到樣品和色譜系統(tǒng)的污染，導(dǎo)致色譜柱耐久性差，使用壽命短。
色譜系統(tǒng)污染主要是指LC液相色譜系統(tǒng)中組分磨損產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動(dòng)相系統(tǒng)沒(méi)有*過(guò)濾的固體顆粒。樣品污染主要是指未*溶解或已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)。由于樣品溶劑和流動(dòng)相溶劑的溶解度不同，被污染的體系被析出。特別是對(duì)中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體和生物藥物的檢測(cè)，由于基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱的污染將更加嚴(yán)重。污染會(huì)導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色，從而帶來(lái)檢測(cè)成本高、檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確等影響。
液相色譜法的發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，但無(wú)論多么復(fù)雜，也有自己的規(guī)律。在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，一般的原則是找到目標(biāo)化合物的峰，然后調(diào)整峰形，再進(jìn)一步改進(jìn)。
光譜上的內(nèi)容主要包括：色譜柱、波長(zhǎng)、流動(dòng)相、溫度、流速和注射量。這意味著如果確定了這些色譜條件，基本上可以認(rèn)為該方法已經(jīng)開(kāi)發(fā)成功，所以我們可以通過(guò)對(duì)這些色譜條件進(jìn)行逐一檢查來(lái)開(kāi)發(fā)該方法。
色譜條件的檢驗(yàn)是通過(guò)色譜中的樣品來(lái)進(jìn)行的，這就要求我們首先建立一個(gè)初始條件，即回答從哪里開(kāi)始的問(wèn)題。在回答“從哪里開(kāi)始”這個(gè)問(wèn)題之前，我們需要了解我們的分析對(duì)象，就像一場(chǎng)戰(zhàn)爭(zhēng)，我們需要知道我們的敵人是誰(shuí)，我們需要了解它的物理和化學(xué)性質(zhì)，尤其是化學(xué)結(jié)構(gòu)公式是非常關(guān)鍵的。
液相色譜儀與樣品預(yù)處理技術(shù)相結(jié)合，具有較高的分辨率和靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)非常相似的物質(zhì)成為可能，并可在復(fù)雜相中分離痕量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在足夠的條件下分離生物化學(xué)物質(zhì)以保持其活性。
為液相色譜儀的注射口和檢測(cè)器類(lèi)型選擇柱尺寸和墊片材料；避免重復(fù)使用氣相色譜儀墊圈；使用合適的刀具（如陶瓷板或金剛石刀）切割立柱；安裝進(jìn)氣口和檢測(cè)器前，確保氣相色譜柱清潔平整。應(yīng)制造商要求安裝氣相色譜儀，并在進(jìn)氣口與檢測(cè)器之間的適當(dāng)距離插入色譜柱；氣柱必須置于柱上，毛細(xì)管柱的任何部分不得接觸柱壁。確保烘箱內(nèi)所有接頭在加熱前是水密的，載氣中無(wú)氧；通過(guò)注射檢查L(zhǎng)C柱安裝是否正確，不要保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序，并設(shè)置載氣線性流量。
液相色譜儀要求
1、 使用前，流動(dòng)相必須用液相色譜級(jí)試劑進(jìn)行過(guò)濾，去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)（過(guò)濾膜為0、45m或更細(xì)）。
2、 流動(dòng)相過(guò)濾后采用超聲波除氣。脫氣后在室溫下使用。
3、純乙腈不能作為流動(dòng)相，會(huì)導(dǎo)致單向閥卡住，阻止泵進(jìn)入液體。
4、 使用緩沖液時(shí)，樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時(shí)，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，使離子*去除。對(duì)于柱塞棒的外部，樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。
5、 不要長(zhǎng)時(shí)間使用這個(gè)儀器。拆下立柱，用插頭密封。注意，由于長(zhǎng)霉，鋼瓶不應(yīng)存放在純水中，而應(yīng)存放在有機(jī)相中（如甲醇等）。
6、 用液相色譜法測(cè)定樣品后，用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器。
7、 C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品。
8、 如因堵塞造成壓力過(guò)高，可在混合器管道的過(guò)濾器單向閥內(nèi)使用預(yù)柱式過(guò)濾器進(jìn)行檢查和清洗。清洗方法：
9、 氣泡會(huì)造成不穩(wěn)定的壓力和較差的重現(xiàn)性，所以在使用過(guò)程中盡量避免氣泡。
10、 液相色譜儀如果液管中沒(méi)有液體，LC液相色譜儀應(yīng)使用注射器吸液：注射前應(yīng)清洗流動(dòng)相。
11、 注意色譜柱的pH值范圍。不要注入強(qiáng)酸或堿性樣品，特別是堿性樣品。
12、 更換移動(dòng)相時(shí)，濾頭應(yīng)放置在燒杯內(nèi)，振動(dòng)時(shí)清洗干凈，再插入新的移動(dòng)相。不混相流動(dòng)轉(zhuǎn)化為異丙醇。
液相色譜系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、采樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄儀組成。流動(dòng)相的蓄電池是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液為流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），因?yàn)楦鞣N組件的示例解決方案兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程，組件在移動(dòng)速度的分布有很大的差異，將逸出的成分從柱中分離出來(lái)，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。
液相色譜儀的工作原理是流動(dòng)相累加器是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液為流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），因?yàn)楦鞣N組件的示例解決方案兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中，各組分的分布在運(yùn)動(dòng)速度上有很大差別，逸出的組分在色譜柱中分離，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。
LC液相色譜儀不適合溫度環(huán)境。正常情況下，在5 ~ 35℃的室溫下即可滿足使用要求。一般來(lái)說(shuō)，濕度環(huán)境需要在20%到85%之間。在高濕度地區(qū)，使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí)，由于環(huán)境濕度高，會(huì)降低氣相色譜儀的絕緣性能，工作靈敏度高時(shí)響應(yīng)值也會(huì)降低。員工在使用氣相色譜儀時(shí)，遇到上述現(xiàn)象應(yīng)采取必要的措施。只需要將樣品制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的影響。流動(dòng)相選擇范圍廣，固定相數(shù)量多，可以分離出熱不穩(wěn)定、不揮發(fā)、不離解、分子量范圍多樣的材料。
在LC液相色譜分析檢測(cè)樣品過(guò)程中，色譜柱會(huì)受到樣品和色譜系統(tǒng)的污染，導(dǎo)致色譜柱耐久性差，使用壽命短。
色譜系統(tǒng)污染主要是指LC液相色譜系統(tǒng)中組分磨損產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動(dòng)相系統(tǒng)沒(méi)有*過(guò)濾的固體顆粒。樣品污染主要是指未*溶解或已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)。由于樣品溶劑和流動(dòng)相溶劑的溶解度不同，被污染的體系被析出。特別是對(duì)中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體和生物藥物的檢測(cè)，由于基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱的污染將更加嚴(yán)重。污染會(huì)導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色，從而帶來(lái)檢測(cè)成本高、檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確等影響。
液相色譜儀的發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，但無(wú)論多么復(fù)雜，也有自己的規(guī)律。在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，一般的原則是找到目標(biāo)化合物的峰，然后調(diào)整峰形，再進(jìn)一步改進(jìn)。
光譜上的內(nèi)容主要包括：色譜柱、波長(zhǎng)、流動(dòng)相、溫度、流速和注射量。這意味著如果確定了這些色譜條件，基本上可以認(rèn)為該方法已經(jīng)開(kāi)發(fā)成功，所以我們可以通過(guò)對(duì)這些色譜條件進(jìn)行逐一檢查來(lái)開(kāi)發(fā)該方法。
色譜條件的檢驗(yàn)是通過(guò)色譜中的樣品來(lái)進(jìn)行的，這就要求我們首先建立一個(gè)初始條件，即回答從哪里開(kāi)始的問(wèn)題。在回答“從哪里開(kāi)始”這個(gè)問(wèn)題之前，我們需要了解我們的分析對(duì)象，就像一場(chǎng)戰(zhàn)爭(zhēng)，我們需要知道我們的敵人是誰(shuí)，我們需要了解它的物理和化學(xué)性質(zhì)，尤其是化學(xué)結(jié)構(gòu)公式是非常關(guān)鍵的。
液相色譜與樣品預(yù)處理技術(shù)相結(jié)合，具有較高的分辨率和靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)非常相似的物質(zhì)成為可能，并可在復(fù)雜相中分離痕量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在足夠的條件下分離生物化學(xué)物質(zhì)以保持其活性。
為液相色譜儀的注射口和檢測(cè)器類(lèi)型選擇柱尺寸和墊片材料；避免重復(fù)使用氣相色譜儀墊圈；使用合適的刀具（如陶瓷板或金剛石刀）切割立柱；安裝進(jìn)氣口和檢測(cè)器前，確保氣相色譜柱清潔平整。應(yīng)制造商要求安裝氣相色譜儀，并在進(jìn)氣口與檢測(cè)器之間的適當(dāng)距離插入色譜柱；氣柱必須置于柱上，毛細(xì)管柱的任何部分不得接觸柱壁。確保烘箱內(nèi)所有接頭在加熱前是水密的，載氣中無(wú)氧；通過(guò)注射檢查L(zhǎng)C柱安裝是否正確，不要保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序，并設(shè)置載氣線性流量。
液相色譜儀要求
1、 使用前，流動(dòng)相必須用液相色譜級(jí)試劑進(jìn)行過(guò)濾，去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)（過(guò)濾膜為0、45m或更細(xì)）。
2、 流動(dòng)相過(guò)濾后采用超聲波除氣。脫氣后在室溫下使用。
3、純乙腈不能作為流動(dòng)相，會(huì)導(dǎo)致單向閥卡住，阻止泵進(jìn)入液體。
4、 使用緩沖液時(shí)，樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時(shí)，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，使離子*去除。對(duì)于柱塞棒的外部，樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。
5、 不要長(zhǎng)時(shí)間使用這個(gè)儀器。拆下立柱，用插頭密封。注意，由于長(zhǎng)霉，鋼瓶不應(yīng)存放在純水中，而應(yīng)存放在有機(jī)相中（如甲醇等）。
6、 用液相色譜法測(cè)定樣品后，用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器。
7、 C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品。
8、 如因堵塞造成壓力過(guò)高，可在混合器管道的過(guò)濾器單向閥內(nèi)使用預(yù)柱式過(guò)濾器進(jìn)行檢查和清洗。清洗方法：
9、 氣泡會(huì)造成不穩(wěn)定的壓力和較差的重現(xiàn)性，所以在使用過(guò)程中盡量避免氣泡。
10、 如果液管中沒(méi)有液體，液相色譜儀應(yīng)使用注射器吸液：注射前應(yīng)清洗流動(dòng)相。
11、 注意色譜柱的pH值范圍。不要注入強(qiáng)酸或堿性樣品，特別是堿性樣品。
12、 更換移動(dòng)相時(shí)，濾頭應(yīng)放置在燒杯內(nèi)，振動(dòng)時(shí)清洗干凈，再插入新的移動(dòng)相。不混相流動(dòng)轉(zhuǎn)化為異丙醇。
液相色譜系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、采樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄儀組成。流動(dòng)相的蓄電池是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液為流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），因?yàn)楦鞣N組件的示例解決方案兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程，組件在移動(dòng)速度的分布有很大的差異，將逸出的成分從柱中分離出來(lái)，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。
液相色譜儀的工作原理是流動(dòng)相累加器是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液為流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），因?yàn)楦鞣N組件的示例解決方案兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中，各組分的分布在運(yùn)動(dòng)速度上有很大差別，逸出的組分在色譜柱中分離，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。
液相色譜儀不適合溫度環(huán)境。正常情況下，在5 ~ 35℃的室溫下即可滿足使用要求。一般來(lái)說(shuō)，濕度環(huán)境需要在20%到85%之間。在高濕度地區(qū)，使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí)，由于環(huán)境濕度高，會(huì)降低氣相色譜儀的絕緣性能，工作靈敏度高時(shí)響應(yīng)值也會(huì)降低。員工在使用氣相色譜儀時(shí)，遇到上述現(xiàn)象應(yīng)采取必要的措施。
