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確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性:紫外可見分光光度計的日常校準(zhǔn)與驗(yàn)證方法

更新時間:2025-10-27      點(diǎn)擊次數(shù):216
   紫外可見分光光度計的日常校準(zhǔn)與驗(yàn)證是確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵,主要包括波長校準(zhǔn)、吸光度校準(zhǔn)、基線校準(zhǔn)及性能驗(yàn)證,具體方法如下:
  一、波長校準(zhǔn)
  使用標(biāo)準(zhǔn)燈:利用汞燈或氘燈的特征發(fā)射譜線(如汞燈的253.7nm、365nm)進(jìn)行校準(zhǔn)。將儀器設(shè)定在特定波長,放置校準(zhǔn)燈,調(diào)整光路使其通過樣品池,觀察吸收峰并記錄實(shí)際波長值,與標(biāo)準(zhǔn)波長對比,偏差超通過儀器內(nèi)置功能或手動調(diào)節(jié)光柵修正。
  使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片:采用Ho³?摻雜玻璃濾光片,掃描其特征吸收峰(如418nm、450nm),修正波長示值。該方法無需復(fù)雜光源切換,但需定期更換濾光片(建議每年1次)。
  二、吸光度校準(zhǔn)
  透射比標(biāo)準(zhǔn)溶液法:
  可見區(qū):使用硫酸銅溶液(CuSO?·5H?O,λ=640nm,A=0.5)。
  紫外區(qū):使用重鉻酸鉀溶液(K?Cr?O?,λ=350nm,A=0.5)。
  配制要求:使用分析純試劑與一級容量瓶,溶液保質(zhì)期不超過7天。采用1cm石英比色皿,以空氣為參比,測量前需用參比液潤洗樣品池3次。要求連續(xù)3次測量RSD≤0.3%,否則需重新裝液。
  中性濾光片法:當(dāng)吸光度>1.5AU時,引入中性濾光片組合(如OD=0.5+1.0疊加),通過多點(diǎn)擬合修正Beer定律偏離。
  三、基線校準(zhǔn)
  使用空白溶劑(如蒸餾水)作為參比,測量其吸光度。調(diào)整儀器的基線調(diào)節(jié)裝置,使空白溶劑的吸光度值為零。重復(fù)測量幾次,確保基線穩(wěn)定。
  四、性能驗(yàn)證
  精度驗(yàn)證:準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別測量每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,計算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差,評估儀器的精度。
  重復(fù)性驗(yàn)證:使用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液,連續(xù)測量多次,計算每次測量的吸光度值,求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差,評估儀器的重復(fù)性。
  線性驗(yàn)證:準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別測量每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,繪制吸光度-濃度曲線,計算曲線的線性相關(guān)系數(shù),評估儀器的線性。
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